مطالعه بیان پروتئین core+1 ویروس هپاتیت C توسط روش میکروسکوپی هم کانون

سابقه و هدف: پروتئین جدیدی تحت عنوان پروتئینF یاcore+1  شناخته شده است که توسط ژنوم ویروس هپاتیت C (HCV) کد می‌شود. عملکرد این پروتئین هنوز مشخص نشده است، اما به‌نظر می‌رسد در سیکل زندگی و بیماری‌زایی ویروس قش مهمی را داشته باشد. در این مطالعه کلون کردن و بیان ژن HCV core+1 در سیستم یوکاریوتی مورد بررسی قرار گرفت تا نقش این پروتئین در مسیرهای سیگنالینگ سلولی و مقاومت ویروس به درمان بررسی گردد. مواد و روش‌ها: ابتدا ژن core+1 داخل پلاسمید pIVEX2.3 به‌عنوان یک ناقل پروکاریوتی کلون شد. در ادامه توالی نوکلئوتیدی 6XHis-tag core+1 حاصل از واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز (PCR) در سایت‌های آنزیمی NheI/BamHI داخل وکتور یوکاریوتی pcDNA3.1(+) کلون شد. این پلاسمید به‌وسیله تجزیه آنزیمی و توالی‌یابی مورد تائید قرار گرفت. پس از ساخته شدن رده سلول کبدی Huh7 به وسیله روش الکتروپوریشن و لیپوفکشن ترانسفکت شدند. با ترانسفکشن هم‌زمان پلاسمید pEGFP-N1 و با تکنیک فلوسایتومتری بازده ترانسفکشن مورد بررسی قرار گرفت. در نهایت بیان و چگونگی استقرار پروتئین core+1 در سلول توسط میکروسکوپ هم‌کانون ارزیابی شد. یافته‌ها: نتایج هضم آنزیمی و تعیین توالی صحت مراحل کلونینگ را نشان داد. آنالیز فلوسایتومتری بازده بالای روش الکتروپوریشن را در مقایسه با لیپوفکشن برای ترانسفکشن سلول‌های Huh7 نشان داد. هم‌چنین بیان پروتئین core+1 در سلول‌های Huh7 با استفاده از آنتی‌بادی anti-His و میکروسکوپ هم‌کانون مورد تائید قرار گرفت. نتیجه گیری: نتایج این پژوهش بیان یوکاریوتی پروتئین core+1 در سلول‌های Huh7 را نشان داد که به این ترتیب می تواند که ابزار مناسبی را برای مطالعه نقش تداخلی پروتئین در مسیرهای سیگنالینگ سلولی و برهم‌کنش آن با سایر پروتئین‌ها در اختیار ما قرار دهد.